作為整個(gè)ELISA實(shí)驗(yàn)的最后一步，檢測結(jié)果的計(jì)算對(duì)于整個(gè)實(shí)驗(yàn)十分重要。

以夾心法ELISA的數(shù)據(jù)處理為例。

1.ELISA的樣本通常要設(shè)置1~2個(gè)復(fù)孔進(jìn)行檢測，這樣才能為結(jié)果的統(tǒng)計(jì)驗(yàn)證提供足夠的數(shù)據(jù)。分別求出標(biāo)準(zhǔn)品、實(shí)驗(yàn)組樣本的吸光度的平均值。復(fù)孔檢測結(jié)果的變異系數(shù)（CV）不應(yīng)超出20%。

2.建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的OD值（吸光度）平均值要減去標(biāo)準(zhǔn)品濃度為0時(shí)的OD平均值，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)、OD值作縱坐標(biāo)，擬合曲線。

通常酶標(biāo)儀會(huì)配置相應(yīng)數(shù)據(jù)處理軟件，具有豐富的曲線擬合選項(xiàng)。如條件不具備，標(biāo)曲的建立建議使用相關(guān)計(jì)算機(jī)程序來完成，如GraphPad Prism、Origin、Excel等。

下圖展示了一條具有代表性的標(biāo)準(zhǔn)曲線，數(shù)據(jù)來自QuantiCyto® Human IFN-γ ELISA（EHC102g.96.）。

注：本圖僅供參考，應(yīng)以同次試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算標(biāo)本中人IFN-γ的含量。

3.根據(jù)擬合的標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過待測樣品的OD值計(jì)算出樣本的濃度。若樣品經(jīng)過稀釋，須乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

4.對(duì)于OD值落在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍外的樣品，為獲得準(zhǔn)確的結(jié)果，需排查可能存在的問題。

（1）待測樣品的OD值低于標(biāo)準(zhǔn)曲線的最-低值，建議設(shè)置陽性對(duì)照孔來排查，用明確表達(dá)的樣品作為陽性對(duì)照，如果標(biāo)準(zhǔn)曲線及陽性樣品均可測得正常的表達(dá)濃度，則表明實(shí)驗(yàn)成功，。可進(jìn)一步排除其他原因，比如待測樣品是否稀釋倍數(shù)過高，這樣可以通過降低稀釋倍數(shù)進(jìn)行改善。如果使用原液檢測還檢測不出，則表明該指標(biāo)在其余待測樣品中表達(dá)含量低于試劑盒的檢測靈敏度。這種情況對(duì)于正常血清/血漿樣本中的炎癥因子較為常見。

（2）待測樣品的OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線的最高值，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重新檢測，計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。

更多詳細(xì)信息請(qǐng)聯(lián)系欣博盛生物