這項(xiàng)研究聚焦于探索-KRT5+細(xì)胞如何調(diào)控CD4+/CD8+效應(yīng)T細(xì)胞，以及這些T細(xì)胞在肺泡再生中的作用。作者發(fā)現(xiàn)，異常修復(fù)的KRT5+細(xì)胞通過CXCR3和Integrin α4β7招募CD4+/CD8+效應(yīng)T細(xì)胞并促進(jìn)其駐留，效應(yīng)T細(xì)胞通過分泌IFNγ抑制club細(xì)胞向AT2細(xì)胞的分化，清除CD4+/CD8+T細(xì)胞或中和IFNγ，阻斷CXCR3或Integrin α4β7，均能促進(jìn)AT2細(xì)胞再生及肺功能修復(fù)。

作者觀察到發(fā)生異常修復(fù)時(shí)肺部出現(xiàn)大量的組織駐留CD4+/CD8+ T細(xì)胞，并與KRT5+基底樣細(xì)胞呈現(xiàn)時(shí)空共定位，隨即使用Bio X Cell抗體進(jìn)行體內(nèi)清除來評(píng)估這些T細(xì)胞的功能。

結(jié)果清除任一種T細(xì)胞，都顯著加快小鼠體重恢復(fù)，提高血氧飽和度，減輕肺纖維化。而在細(xì)胞層面，體內(nèi)清除CD4+或CD8+ T細(xì)胞后，譜系示蹤技術(shù)觀察到Scgb1a1（標(biāo)記所有club細(xì)胞）來源的AT2細(xì)胞持續(xù)地顯著增加。這些結(jié)果表明CD4+/CD8+ T細(xì)胞在病毒清除后持續(xù)駐留，并抑制club細(xì)胞向AT2細(xì)胞分化，及肺功能恢復(fù)。

Bio X Cell抗體使用：

從流感感染7 天后（避免影響病毒清除）開始，小鼠每三天腹腔注射500μg CD4抗體（#BE0003-1，克隆GK1.5） 或CD8α抗體（#BE0004-1，克隆53-6.7），同型對(duì)照組分別注射#BE0090（克隆LTF-2）或#BE0089（克隆2A3），流式分析驗(yàn)證清除效果，感染后第14天和21天分析。

為排除體內(nèi)復(fù)雜環(huán)境的干擾，作者建立了 3D 上皮類器官與 T 細(xì)胞的體外共培養(yǎng)模型，以檢測細(xì)胞水平的直接互作，并鑒定其中的關(guān)鍵作用分子。在這一體外活細(xì)胞模型中，Bio X Cell 抗體同樣表現(xiàn)出卓-越的性能。

作者發(fā)現(xiàn)CD4+/CD8+ T細(xì)胞在體外模型中傾向于直接黏附氣道類器官而非肺泡類器官，并且病毒感染后趨化因子Cxcl10/11及其受體Cxcr3的基因表達(dá)上調(diào)。隨后在共培養(yǎng)模型中使用Bio X Cell抗體阻斷CXCR3驗(yàn)證其作用。結(jié)果CXCR3抗體處理顯著降低CD4+/CD8+ T細(xì)胞對(duì)氣道類器官的黏附能力，證實(shí)T細(xì)胞招募依賴于CXCL10/11-CXCR3軸的趨化作用。

而且CD4+/CD8+ T細(xì)胞在共培養(yǎng)中強(qiáng)效抑制club細(xì)胞形成肺泡類器官，而加入Bio X Cell抗體中和IFNγ后，這種抑制完-全被逆轉(zhuǎn)，中和TNFα則無效，表明T細(xì)胞通過分泌IFNγ抑制肺泡再生。

Bio X Cell抗體使用：

培養(yǎng)基中加入CXCR3抗體（#BE0249，克隆CXCR3-173）、IFNγ抗體（#BE0055，克隆XMG1.2）、TNFα抗體（#BE0058，克隆XT3.11）及同型對(duì)照，均為50μg/mL，每三天更換一次培養(yǎng)基，第10天收獲類器官進(jìn)行分析。

明確了機(jī)制后，作者嘗試通過阻斷T細(xì)胞的招募和駐留來治療。

IFNγ中和抗體治療改善了肺功能，使損傷區(qū)域的SFTPC+細(xì)胞獲得與T細(xì)胞清除相當(dāng)?shù)脑黾樱@著降低趨化因子表達(dá)及組織駐留T細(xì)胞的數(shù)量。而使用抗體在小鼠體內(nèi)阻斷CXCR3或Integrin α4β7均顯著減少肺駐留 T 細(xì)胞，改善小鼠的血氧飽和度，降低肺纖維化。

這些結(jié)果再次確認(rèn)這些分子在KRT5?細(xì)胞阻礙肺泡再生中的關(guān)鍵作用，并為治療嚴(yán)重感染導(dǎo)致的肺損傷提供可行的轉(zhuǎn)化方案。

Bio X Cell抗體使用：

從流感感染7 天后開始，小鼠每三天腹腔注射500μg IFNγ抗體（#BE0055，克隆XMG1.2），250μg CXCR3抗體（#BE0249，克隆CXCR3-173）或400μg Integrin α4β7抗體（#BE0034，克隆DAKTK32），并設(shè)置同型對(duì)照組，感染后第14天和21天分析。

這項(xiàng)研究通過在小鼠體內(nèi)模型和3D類器官-免疫共培養(yǎng)體外模型之間的反復(fù)驗(yàn)證，極大地增強(qiáng)了研究結(jié)論的可靠性，也為后續(xù)開發(fā)病毒感染后肺纖維化、長新冠等后遺癥的藥物提供了多個(gè)明確的候選靶點(diǎn)。

而Bio X Cell高品質(zhì)的InVivoMAb系列功能抗體，憑借其高純度、低內(nèi)毒素和無防腐劑的優(yōu)勢，尤其適合于小鼠體內(nèi)和3D類器官等各類活體、活細(xì)胞的長時(shí)程實(shí)驗(yàn)，在不同模型間為數(shù)據(jù)連貫性和結(jié)論可靠性保駕護(hù)航。

參考文獻(xiàn)