來自TriLink的Next-level體外轉錄（IVT）試劑盒
體外轉錄技術（In Vitro Transcription，IVT）是指在無細胞體系中，以 DNA 為模板，利用 RNA 聚合酶催化合成 RNA 分子的技術。其核心優勢是無需依賴活細胞，可快速、定向生產高純度、高特異性的 RNA（如 mRNA、siRNA、shRNA、rRNA 等），且能通過修飾優化 RNA 的穩定性、翻譯效率或免疫原性，已成為分子生物學、基因治療、疫苗研發等領域的核心工具。
CleanCap® IVT試劑盒：簡而不凡
TriLink的CleanCap® IVT試劑盒通過體外轉錄及 CleanCap® 共轉錄加帽合成 mRNA 所需的全部核心組分。極大的優化了RNA合成與加帽流程，同時顯著提升實驗結果，是高性能RNA合成的一體化解決方案。
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CleanCap® 目前有兩款高效的mRNA合成Kit，無論您是IVT領域的新手，還是想要將蛋白表達效率-最-大化，這兩款試劑盒都可以助您一步獲得高產量、低dsRNA的加帽mRNA：
CleanCap® AG (3' OMe) CleanScript™ IVT Kit ：
通用性強，無需過多優化；采用CleanCap® AG (3' OMe) 帽類似物，是原始CleanCap® AG的改良版本，可實現更高的蛋白表達水平。
CleanCap® M6 High Yield IVT Kit：
包含TriLink最-新的帽類似物CleanCap® M6，相較于酶法加帽和CleanCap® AG類似物，可以實現更高的蛋白表達；為了實現最-佳產率，需要對5' UTR序列進行評估。
圖一：mRNA的帽結構會影響蛋白表達水平。采用 CleanCap M6 帽類似物的mRNA，其蛋白表達水平高于其前代產品（A）及酶法加帽技術(B)。
圖二：TriLink的新型RNA聚合酶可以顯著降低mRNA合成過程中dsRNA的形成。在使用 CleanCap AG（3′OMe）和 CleanCap M6 帽類似物合成未修飾或 N1 - 甲基假尿苷（N1 MePsU）修飾的 mRNA 時，CleanScribe™ RNA 聚合酶可顯著減少dsRNA的形成。
圖三：優化的IVT方案可顯著提高 CleanCap AG（3’OMe） mRNA的產率。 采用TriLink的CleanScript IVT方案，CleanCap AG（3’OMe）mRNA濃度最-高可達10 mg/mL，較傳統方案提升高達兩倍。
圖四：脈沖進料可以進一步提高CleanCap M6 mRNA的產率。 經2h脈沖進料（操作方法參考protocol）后，CleanCap M6 mRNA 的產率最-高可達10mg/ml，相較于傳統流程提升近2倍。
兩款Kit如何選擇呢？
CleanCap® AG (3' OMe) CleanScript™ IVT Kit | CleanCap® M6 IVT Kit, High Yield | |
操作經驗 | 通用序列兼容性強，適合該開始進行mRNA研究的用戶 | 優化蛋白表達，適合希望最-大限度提高mRNA表達和整體效力的客戶 |
帽類似物 | CleanCap® AG (3' OMe) | CleanCap® M6 |
蛋白表達水平 | +++ | ++++ |
可合成的RNA類型 | mRNA | mRNA |
序列兼容性 | 通用性強-適用所有UTR | 5' UTR序列可能影響產率 |
轉錄起始位點 | AG起始 | AG起始 |
包含的修飾rNTP | N1 - 甲基假尿苷 | N1 - 甲基假尿苷 |
包含的10×緩沖液 | CleanScript™ 體外轉錄緩沖液 | M6體外轉錄緩沖液 |
包含的酶混合物 | AG CleanScribe™ RNA 聚合酶混合物 | M6 CleanScribe™ RNA 聚合酶混合物 |
每100 µL反應預期產率 | 0.8-1mg | 0.8-1mg |
下方表格對兩款試劑盒的特性進行了對比，兩款產品根據對蛋白表達水平、下游應用及IVT操作經驗的不同需求，提供了各自獨特的優勢。您可以根據具體需求，選擇最-適合您的試劑盒。
訂購信息：
產品名稱 | 貨號 | 反應規格 |
CleanCap® AG (3' OMe) CleanScript™ IVT Kit | K-7413-25 | 25 x 100 μL 或 125 x 20 μL |
CleanCap® M6 IVT Kit, High Yield | K-7453-25 |
CleanCap® AG (3' OMe) CleanScript™ IVT Kit中組分：
Component | Concentration | Amount |
CleanCap® Reagent AG (3′ OMe) | 100 mM | 10 µmol |
Adenosine-5′-Triphosphate | 100 mM | 100 µmol |
Cytidine-5′-Triphosphate | 100 mM | 100 µmol |
Guanosine-5′-Triphosphate | 100 mM | 100 µmol |
Uridine-5′-Triphosphate | 100 mM | 100 µmol |
N1-Methyl-Pseudouridine-5′-Triphosphate | 100 mM | 100 µmol |
AG CleanScribe™ RNA Polymerase Mix | 10X | 250 µL |
10X AG CleanScript™ IVT Buffer | 10X | 1 mL |
FLuc Control Plasmid | 0.5 µg/µL | 25 µg |
CleanCap® M6 IVT Kit中組分：
Component | Concentration | Amount |
CleanCap® Reagent M6 | 100 mM | 25 µmol |
Adenosine-5′-Triphosphate | 100 mM | 100 µmol |
Cytidine-5′-Triphosphate | 100 mM | 100 µmol |
Guanosine-5′-Triphosphate | 100 mM | 100 µmol |
Uridine-5′-Triphosphate | 100 mM | 100 µmol |
N1-Methyl-Pseudouridine-5′-Triphosphate | 100 mM | 100 µmol |
M6 CleanScribe™ RNA Polymerase Mix | 10X | 250 µL |
10X M6 IVT Buffer | 10X | 1 mL |
FLuc Control Plasmid （linearized） | 0.5 µg/µL | 25 µg |
相關產品
可用作對照的目錄mRNA
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
CleanCap® M6 EGFP mRNA (N1MePsU) | L-8101 | 0.1mg、1mg、5mg或定制 |
CleanCap® M6 FLuc mRNA (N1MePsU) | L-8102 | |
CleanCap® M6 mCherry mRNA (N1MePsU) | L-8103 | |
CleanCap® M6 Cas9 mRNA (N1MePsU) | L-8106 | |
CleanCap® M6 EPO mRNA (N1MePsU) | L-8109 | |
CleanCap® M6 Cre mRNA (N1MePsU) | L-8111 |
常見問題
Q：我該如何選擇這兩款試劑盒？
A：試劑盒的選擇取決于您期望的蛋白表達水平、下游應用場景，以及您的 IVT（體外轉錄）實驗經驗。
CleanCap® AG (3' OMe) CleanScript™ IVT kit：這是一款通用性強的試劑盒，僅需少量優化即可合成高產量、低雙鏈 RNA（dsRNA）的加帽 mRNA。經證實，CleanCap® AG (3' OMe) 帽類似物比初代 CleanCap® AG 帽類似物的蛋白表達水平更高，且已應用于商業化獲批的 mRNA 疫苗中。
CleanCap® M6 IVT kit（High yeild）：該試劑盒包含最-新的 CleanCap® M6 帽類似物，適合追求比酶法加帽及前代 CleanCap® AG 類似物更高蛋白表達的用戶。若要通過標準方案達到最-高 5 mg/mL 的產量，或通過補充脈沖進料方案達到 10 mg/mL 的產量，用戶可能需要評估自身 5'-UTR序列的兼容性。
Q：可以用這兩個試劑盒來制備不加帽的mRNA嗎？
A：對于CleanCap® AG（3' OMe）和CleanCap® M6 IVT試劑盒，你可以在我們提供的protocol中省略加帽步驟，從而獲得無帽mRNA，預期產量相近。不過，如果你的模板是“AG起始"，5'端的異質性會更高（例如A和G的混合物）。根據無帽mRNA的應用需求，若有需要，可通過磷酸酶處理去除5'三磷酸基團。
Q：使用 CleanCap® M6 帽類似物合成的 mRNA，其翻譯效率與 CleanCap® AG (3' OMe) 帽類似物及酶法加帽相比如何？
A：通過體外和體內實驗，我們持續觀察到：與 CleanCap AG (3' OMe) 帽類似物及酶法加帽的 mRNA 相比，用 CleanCap M6 加帽的 mRNA 蛋白表達水平更高（提升幅度≥30%）。
這種蛋白表達的提升，部分原因可能是 CleanCap M6 類似物上的 N6 - 甲基化腺苷抑制了 Dcp2 介導的脫帽作用。
Q：5'UTR序列會對CleanCap® M6 IVT 試劑盒產生什么影響？
A：我們觀察到，CleanCap M6 IVT 試劑盒的產量可能會受到部分 5'UTR 序列的影響。如果您對自己使用的UTR序列有顧慮，請聯系我們獲取技術支持。
Q：如何優化 mRNA 的 5'UTR 和 3'UTR 序列？
A：mRNA 的5'UTR和3'UTR的優化取決于您的具體研究目的，以及 mRNA 對應的靶細胞或組織類型。
為支持這一需求，TriLink的Officinae Bio 服務提供專業的優化服務：您只需提供您的序列和 UTR 信息，TriLink會進行密碼子優化，以幫助實現最佳表達效果。
此外，查閱已發表的文獻是確定與您的應用場景相關的UTR序列的有效方式。我們也建議開展篩選實驗，以評估翻譯效率。
如果您使用的是 TriLink的mRNA 服務，我們在 DNA 模板中集成了自主 UTR 序列選項，您可以將開放閱讀框（ORF）插入其中，從而簡化實驗流程。
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